Реклама
Новости
Как помочь "трудному" ребенку читать далее>>> 27.12.16
В России по продажам лидирует средство для больных ВИЧ читать далее>>> 08.12.16
Как восполнить дефицит йода? читать далее>>> 24.11.16
Как женщине избавиться от морщин? читать далее>>> 16.11.16
Эндоскопическое оборудование читать далее>>> 10.10.16
Последние записи:
СептаНазал – идеальное лекарство от хронического насморка! читать далее>>> 27.01.17
Лечения хронического лейкоза в клиниках Израиля читать далее>>> 27.01.17
Анкета донора ооцитов читать далее>>> 03.11.16
Что из себя представляет аппарат Альтера читать далее>>> 05.10.16
Какие шансы забеременеть после 40 лет? читать далее>>> 11.08.16


Разработка иммунологических методов для определения гепатита

Разработка иммунологических методов для определения гепатита

У больных в острой стадии заболевания вирусным гепатитом А, для его дифференциации от вирусных гепатитов В и ни А, ни В, а также для раннего выявления лиц, вовлеченных в инфекционный процесс, в очагах гепатита А используют определение антител против ВГА, принадлежащих к иммуноглобулинам класса М (IgM-анти-ВГА) с помощью радио- и энзимоиммунологического методов.

Существующий энзимоиммуносорбентный метод  (ЭИМ) обнаружения IgM-анти-ВГА  имеет  значительную  продолжительность (более 40 часов), что существенно ограничивает его оперативное использование в клинической практике и эпидемиологии.

Нашей целью было воспроизведение упрощенной модификации ЭИМ, пригодной для относительно быстрого обнаружения IgM-анти-ВГА, на основе ранее использованного нами модифицированного ЭИМ для обнаружения ВГА и суммарных антител против него.

Указанная модификация предусматривает использование для первичного «покрытия» твердой фазы антителами к IgM человека (анти-IgM) и осуществляется в соответствии с принципом последовательного формирования на твердой фазе четырехслойного «сэндвича»: анти-IgM - IgM-анти-ВГА - ВГА - анти-ВГА, меченные ферментом.

В качестве твердой фазы использовали поверхность полистироловых шариков (ПСШ) диаметром 5,0 мм (ОСТ 6-05-202-78), помещенные в стандартные стеклянные пробирки 105X9 мм. Поверхность ПСШ «покрывали» анти-IgM путем их инкубации при определенных температурно-вре-менных режимах в оптимальном разведении сыворотки, содержащей анти-IgM. Сыворотки обследуемых больных и контактных разводили фосфатно-солевым буфером рН 7,4 до 1:1000, и исследовали на наличие IgM-анти-ВГА. В качестве контроля в исследовании использовали сыворотку здорового, не содержащую IgM-анти-ВГА. Антигеном ВГА являлась 10% водная суспензия фекалий больных в острой фазе гепатита А, содержащих ВГА по данным иммуноэлектронной микроскопии и стандартного ЭИМ. Контролем служили такая же суспензия фекалий здорового, не содержащая ВГА.

Анти-ВГА «метили» пероксидазой хрена перийодатным методом. В рабочее разведение полученного конъюгата вносили 2,5% нормальной сыворотки человека без IgM-анти-ВГА и других антител к ВГА. Субстратом служил о-фенилендиамин в виде 0,04% раствора с добавлением 0,025% перекиси водорода.

С помощью описанной модификации ЭИМ и ранее применяемого на присутствие IgM-анти-ВГА было параллельно исследовано 198 сывороток от больных, контактных с ними и здоровых лиц. При сравнении результатов обоих тестов отмечалась высокая степень их совпадения: результаты полностью совпали в 98,6% случаев.

ПСШ, будучи «покрыты» анти-IgM, сохраняли свои иммуносорбентные свойства по отношению к IgM человека (в т. ч. к IgM-анти-ВГА) на протяжении 4-5 месяцев при хранении их в альбуминсодержащих растворах с антибиотиком при 4°С. Это позволило одномоментно «покрыть» значительные количества таких ПСШ этими антителами, хранить их в бытовом холодильнике в течение почти полугода и использовать в указанной модификации ЭИМ по мере необходимости. Использование таких ПСШ обеспечило сокращение продолжительности теста в момент исследования до 20 часов т. е. в 2 раза по сравнению с ранее применяемым ЭИМ.


Нравится
Версия для печати Просмотров: 2

Поиск
Популярные записи
Анастомозит как осложнение после операции на желудке читать далее>>> 13.07.12
Аномалии отхождения позвоночных артерий читать далее>>> 05.01.13
Симптомы: озноб, желтуха, печеночный запах, звездочки, зуд читать далее>>> 18.07.12
Диспептические расстройства читать далее>>> 02.07.12
Симптомы: печеночные ладони, увеличение печени читать далее>>> 18.07.12
Похожие записи
Профилактика кровотечений при варикозном расширении вен

Для профилактики кровотечений из ВРВ у пациентов...

У пациентов на фоне тяжелой ПечН и портальной...

Для возникновения спонтанного бактериального...

Опрос
Как вам сайт?


Error. Page cannot be displayed. Please contact your service provider for more details. (17)