Реклама
Новости
Как помочь "трудному" ребенку читать далее>>> 27.12.16
В России по продажам лидирует средство для больных ВИЧ читать далее>>> 08.12.16
Как восполнить дефицит йода? читать далее>>> 24.11.16
Как женщине избавиться от морщин? читать далее>>> 16.11.16
Эндоскопическое оборудование читать далее>>> 10.10.16
Последние записи:
СептаНазал – идеальное лекарство от хронического насморка! читать далее>>> 27.01.17
Лечения хронического лейкоза в клиниках Израиля читать далее>>> 27.01.17
Анкета донора ооцитов читать далее>>> 03.11.16
Что из себя представляет аппарат Альтера читать далее>>> 05.10.16
Какие шансы забеременеть после 40 лет? читать далее>>> 11.08.16


Иммуноферментный анализ (ИФА)

Иммуноферментный анализ (ИФА) в последние годы привлекает внимание многих исследователей в области биологии и медицины. Особенно широкое применение он получил в диагностике инфекционных заболеваний. Являясь одним из наиболее чувствительных методов определения антигенов и антител, метод ИФА обладает рядом преимуществ (простота учета результатов анализа, стабильность препаратов), позволяющих считать его удобным для внедрения в практическую медицину.

Впервые определение HBsAg методом ИФА продемонстрировали Wolters и соавт. Широкие клинико-эпидемиологические исследования по гепатиту В с помощью этого метода стали проводиться после выпуска некоторыми зарубежными фирмами диагностических наборов для определения специфических маркеров этого заболевания, важнейшим из которых является HBsAg. В нашей стране промышленный выпуск таких диагностикумов до настоящего времени отсутствует, а в отечественной литературе имеется весьма ограниченное число данных по лабораторным разработкам этогс метода.

Целью нашей работы явилось приготовление иммуно-ферментного диагностикума для определения HBsAg с использованием отечественных препаратов.

Для приготовления конъюгатов использовали фермент-пероксидазу хрена (ПХ) с показателем RZ = 2,7 завода «Хим-реактив» (г. Олайн).

Источником специфических антител служила высокоактивная сыворотка осла, иммунизированного препаратом очищенного HBsAg. Антисыворотку истощали сорбентом, приготовленным из нормальной сыворотки крови человека, полимеризованной глутаровым альдегидом. Фракцию IgG выделяли на колонке с ДЭАЭ-сефадексом. Приготовление конъюгата антител с ПХ проводили по периодатному методу, исключив стадию отделения свободной ПХ гельфильт-рацией. В качестве твердой фазы использовали полистироловые микроплато отечественного производства, которые инкубировали с раствором антител, затем отмывали и хранили при +5°С. Определение HBsAg проводили сэндвич-реакцией в очищенных препаратах, а также в сыворотках больных и носителей. Субстратом для ферментативной реакции служил 0,005% водный раствор перекиси водорода, содержащий 0,4 мг/мл ортофенилендиамина. Учет результатов реакции проводили на спектрофотометре при длине волны 492 нм. Положительными считали пробы, оптическая плотность которых не менее чем в 2,1 раза превышала средний уровень оптической плотности отрицательных контролей (сывороток, не содержащих HBsAg по радиоиммунному методу). Все положительные результаты подтверждали реакцией нейтрализации, добавляя к раствору конъюгата намеченную антисыворотку к HBsAg и в контроле - соответствующую нормальную сыворотку. Наличие HBsAg в испытуемой пробе считали доказанным, если подавление окраски при нейтрализации по сравнению с контролем составило не менее 50%.

Чувствительность приготовленного диагностикума определяли на препаратах очищенного HBsAg. Минимальное количество его, выявляемое данным методом, составило 5-7 нг/мл. ИФА был чувствительнее ВИЭФ в 500-2000 раз, а РПГА в 5-15 раз.

Для проверки специфичности метода исследованы 214 сывороток больных с диагнозом вирусный гепатит, исследованных на HBsAg в РПГА и в РИА (исследование проведено М. И. Михайловым и С. О. Вязовым). Все 44 сыворотки, положительные в РПГА, были положительны также в ИФА и в РИА; кроме того, методами ИФА и РИА были выявлены еще 5 положительных сывороток.

Таким образом, можно заключить, что полученный диагностикум отвечает требованиям к чувствительности и специфичности, предъявляемым к методу ИФА, а использование отечественных препаратов делает его доступным для внедрения в широкую практику.


Нравится
Версия для печати Просмотров: 45

Поиск
Популярные записи
Анастомозит как осложнение после операции на желудке читать далее>>> 13.07.12
Аномалии отхождения позвоночных артерий читать далее>>> 05.01.13
Симптомы: озноб, желтуха, печеночный запах, звездочки, зуд читать далее>>> 18.07.12
Диспептические расстройства читать далее>>> 02.07.12
Симптомы: печеночные ладони, увеличение печени читать далее>>> 18.07.12
Похожие записи
Профилактика кровотечений при варикозном расширении вен

Для профилактики кровотечений из ВРВ у пациентов...

У пациентов на фоне тяжелой ПечН и портальной...

Для возникновения спонтанного бактериального...

Опрос
Как вам сайт?